DH10B化學感受態(tài)細胞

產品規(guī)格CAT#: BFNC86018-01(10×100ul)/BFNC86018-02(50×100ul)

DH10B：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG

產品說明

DH10B菌株來源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。φ80lacZ?M15 marker的存在使DH10B可用于藍白斑篩選，rpsL賦予其鏈霉素抗性。

青旗生物生產的DH10B感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. DH10B感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13小時。

DH10B化學感受態(tài)細胞

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少終用于涂板的菌量。